碧云天生产的Beyo3D™ ER-Tracker Green染色试剂盒(Beyo3D™ ER-Tracker Green Assay Kit)，是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的活细胞内质网染色的试剂盒。仅需染色20分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的活细胞内质网绿色荧光染色。

ER-Tracker Green为采用Molecular Probes公司的BODIPY® FL进行了荧光标记的glibenclamide。Glibenclamide即glyburide，中文名称为格列本脲，是一种常用2型糖尿病的治疗药物，可以高度结合主要定位在内质网上的包含ATP敏感的钾离子通道(KATP channel)的磺脲类(Sulphonylurea)受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。ER-Tracker Green适用于活细胞内质网的荧光染色，但不适合用于固定细胞内质网的荧光染色。

ER-Tracker Green呈绿色荧光，检测时最大激发光波长为504nm，最大发射光波长为511nm。

本产品适用范围广。本产品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官，包括超低吸附细胞培养板、Matrix-Gel™基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。

本产品使用便捷，整个检测过程仅需约30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色，仅需将本试剂盒中的Beyo3D™ ER-Tracker Green染色液(250X)按照相应比例用Beyo3D™ ER-Tracker Green Assay Buffer配制成Beyo3D™ ER-Tracker Green检测工作液，避光孵育20分钟即可进行荧光检测。本产品对3D培养的HCT-116细胞的染色效果参考图1。

图1.碧云天Beyo3D™ ER-Tracker Green染色试剂盒(C1455)对于3D培养的HCT-116细胞的染色效果图。5000个HCT-116细胞在使用碧云天3D细胞培养包被试剂盒(U形底96孔板) (C0366)包被的U形底96孔板中培养72小时，然后吸除培养液后直接加入Beyo3D™ ER-Tracker Green染色液(1X)染色20分钟(图中各染料可混合配制后使用)。结果显示，Beyo3D™ ER-Tracker Green染色试剂盒对于3D细胞染色效果清晰、明亮，Beyo3D™ ER-Tracker Green染色的内质网呈现绿色荧光(图B)，Beyo3D™ Mito-Tracker Red CMXRos染色液(1000X) (C1439)染色的线粒体呈现红色荧光(图C)，Beyo3D™ Hoechst 33342染色液(C1345)染色的细胞核呈现蓝色荧光(图D)，绿色荧光、红色荧光及细胞核蓝色荧光的叠加(Merge)效果见图E。实际检测效果会因细胞株、实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

传统的细胞培养大多以二维(Two-dimensional, 2D)的形式展开，但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异，可能会因为细胞结构和组织形态的缺失，使实验结果的可信度降低[1-3]。三维(Three-dimensional, 3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境，更能代表体内组织，也能更真实的反映细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用，细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应，3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型，能够获得与体内实验更加一致的实验结果[4-5]。

3D肿瘤细胞模型越来越多地被用于了解疾病机制和药物研发。2D培养的肿瘤细胞，其单侧细胞膜可以均匀地获得营养和氧气，而3D培养的肿瘤细胞团的内部细胞获得营养和氧气的机会更少，形成自然的营养和氧气梯度，能更好地模拟体内微环境条件，因此3D培养的肿瘤球状体(Spheroid)或肿瘤类器官(Organoid)等能更好地模拟体内肿瘤，更利于小分子药物筛选或者肿瘤相关分子机制的研究，也更能准确地预测药物治疗的体内反应、疗效或毒性。同时，2D肿瘤细胞模型体外扩增有一定局限性，在传代后容易丧失原肿瘤的遗传异质性，出现优势克隆选择性，从而降低临床相关性。相比于2D细胞模型，3D细胞球或者类器官很多情况下能提供更可信的研究结果，简化并加速药物评价流程。自2009年小肠类器官首次建立至今，3D细胞和类器官研究已经扩展到很多组织系统，并成为生命科学最热门的领域之一。

按照96孔板每孔需要0.4μl Beyo3D™ ER-Tracker Green染色液(250X)，本试剂盒小包装可以进行50个样品的检测。

-20ºC保存，半年有效。Beyo3D™ ER-Tracker Green染色液(250X)须避光保存。

ER-Tracker Green在4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。

细胞球在外力的作用下容易变形或分散，PBS洗涤及换液等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。

格列本脲的药理学活性可能会影响内质网的一些功能；某些特殊细胞中磺脲类受体的可变表达可能会导致非内质网特异性染色。

ER-Tracker Green适用于活细胞内质网的荧光染色，但不适合用于固定细胞内质网的荧光染色。如果经ER-Tracker Green染色后的细胞需要进行固定操作，使用4%多聚甲醛在37ºC固定2分钟。

ER-Tracker Green染色后的细胞不能用Triton X-100通透，Triton X-100通透处理会导致ER-Tracker Green的荧光染色消失。

本产品浓度经过碧云天的优化，确保可以满足活细胞染色及各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的ER-Tracker Green，请选购碧云天的ER-Tracker Green (内质网绿色荧光探针) (C1042)。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。