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细胞相关> 细胞标记与染色> 流式检测
产品编号: C1734-2ml
产品包装:2ml
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价格: ¥ 188.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C1734-0.5ml BeyoFC™ PI染色液(50X) 0.5ml 58.00元
C1734-2ml BeyoFC™ PI染色液(50X) 2ml 188.00元

碧云天的BeyoFC™ PI染色液(50X),即BeyoFC™ Propidium Iodide Staining Solution (50X)或BeyoFC™碘化丙啶染色液(50X),是一种基于PI特异性染色细胞膜丧失完整性的坏死细胞的特性,从而能够特异地对坏死细胞进行荧光染色、用于流式细胞术检测时染色和排除死细胞的红色荧光染色液。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种非细胞膜渗透性荧光染料,不能穿过具有生物活性的细胞膜,只能通过细胞膜的破损区域从而到达细胞内[1, 2],因此对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,PI可进入细胞并与核酸结合,从而可以产生红色荧光,这种结合很少或几乎没有序列偏好,每4-5个碱基对插入一个PI分子。

PI的分子式为C27H34I2N4,分子质量为668.39,CAS number为25535-16-4。形成DNA复合物的最大激发光波长为535nm,最大发射光波长为617nm。PI和DNA复合物的激发光与发射光光谱参考图1。

图1.PI和DNA复合物的激发光谱与发射光谱。

在流式细胞仪检测时,死细胞的存在可能会导致检测结果准确性降低。因为死细胞可能会与抗体发生非特异性结合,从而产生假阳性结果,并降低真实阳性信号的动态范围。同时,通常死细胞具有更高的自发荧光,且荧光信号分布广泛,这会导致较高的背景荧光,使对弱阳性样品及阳性比例较低样品的区分变得困难。常规操作中的离心、洗涤等步骤都会产生的少量死细胞,细胞活性较低的样品如非免疫组织细胞悬液、较长时间放置的血液样品等也会增加死细胞比例,因此流式实验中非常有必要通过PI染色、7-AAD染色等类似方法实现对于死细胞的荧光染色,以便于后续流式分析时排除死细胞。

本染色液已通过流式分析检测,可以简单便捷地进行坏死细胞检测和分群,同时又不影响正常细胞的状态。使用本产品进行坏死的细胞流式细胞仪检测的效果请参考图2。

图2.碧云天BeyoFC™ PI染色液(50X) (C1734)用于坏死细胞流式检测的效果图。100万个小鼠脾脏细胞(分离后冰上保存约48小时),用100µl BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711)重悬,加入2µl本产品并孵育10分钟后进行流式检测。图中可见PI染色组出现了红色荧光阳性的细胞群(PI组)。Control组为不加PI的阴性对照。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

按照每100µl细胞重悬液使用2µl BeyoFC™碘化丙啶染色液(50X)进行检测,每1ml本产品可进行500次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C1734-0.5ml BeyoFC™ PI染色液(50X) 0.5ml
C1734-2ml BeyoFC™ PI染色液(50X) 2ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC避光保存,至少一年有效。

注意事项:

如果有细菌或真菌污染,可能会严重影响检测效果。

染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致坏死细胞数量的增加。

荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

如需进行细胞周期检测,推荐使用碧云天的细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C1052)、一步法细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C1055)或BeyoFC™ PI/RNase即用型染色液(C7131)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.细胞按照实验设计进行适当处理后,制备成单细胞悬液,计数。取适量细胞,4ºC,500×g离心5分钟,弃上清。每个样品推荐的细胞用量为1×106。
2.加入100µl BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711),然后轻轻重悬细胞。
3.根据相应的抗体说明书进行细胞表面抗原的免疫荧光染色。
4.向细胞悬液中加入2µl BeyoFC™ PI染色液(50X),吹打混匀后室温避光孵育10-15分钟。
注:用于活细胞与死细胞区分染色时,本染色液与细胞内免疫染色步骤不兼容。如果实验涉及到细胞内免疫染色,则需使用可兼容固定步骤的胺反应性染料,并在细胞内免疫染色开始前进行死细胞染色。
5.孵育结束后可直接使用流式细胞仪检测,PI结合DNA后的最大激发光波长为535nm,最大发射光波长为617nm。
注:在检测前,也可将细胞用BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711)洗涤2-3次,最后用每个样品加入0.5-1ml BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液重悬细胞后用于检测,这样染色效果更好。
注:相关使用说明仅供参考,具体可根据细胞类型、实际检测效果及流式细胞仪配置等进行一些优化或调整,BeyoFC™ PI染色液(50X)可在0.5X-2X范围内摸索最佳工作浓度。
参考文献:
1.Arndt-Jovin DJ, Jovin TM. Methods Cell Biol. 1989. 30:417-48.
2.Waring MJ. J Mol Biol. 1965. 13(1):269-82.
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