使用说明：
1.染色液的配制。
按照6孔板每孔1ml脂滴染色液的体系，参考下表配制适量的染色液，并充分混匀。

Reagent	1 Sample	10 Samples	100 Samples
LipiD-Green (1000X)	1μl	10μl	100μl
Hoechst 33342 (1000X)	1μl	10μl	100μl
Staining Enhancer (100X)	10μl	100μl	1ml
Assay Buffer	988μl	9.88ml	98.8ml
Staining Solution	1ml	10ml	100ml

注1：配制好的Staining Solution必须一次使用完毕，不建议冻存或4ºC保存后继续使用。
注2：对于活细胞染色，建议使用含血清的培养液作为Assay Buffer；对于固定细胞染色，可使用PBS (C0221A)作为Assay Buffer。Assay Buffer可能会对染色结果有一定影响，可根据具体实验情况进行一定的摸索或优化。染色液中LipiD-Green的浓度可以根据染色效果在0.5X-5X之间适当调整。
注3：Staining Enhancer为可选，但Staining Enhancer可使脂滴染色更加快速，荧光染色更加明亮，染色背景更低。
注4：Hoechst 33342染色为可选，可根据实际需求进行选做。Hoechst 33342为蓝色荧光，最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm。
2.荧光显微镜检测。
a.接种培养。将细胞接种于6孔板等多孔板、细胞培养皿或者细胞爬片上。如有必要，按实验设计对细胞进行一定处理。
b.固定(选做)。
(a)取出待检测的细胞，使用PBS洗涤两遍，吸除PBS。
(b)加入4%多聚甲醛固定液(P0099)室温固定10-15分钟。
注1：LipiD-Green和Hoechst 33342都适用于活细胞染色，也适用于固定后细胞的染色。
注2：由于醇类能够溶解脂质，因此请使用醛类固定液进行固定。
注3：如果需要进行免疫染色而进行细胞通透，须避免使用含Triton X-100或Tween-20等去垢剂的通透液，而使用不会溶解细胞膜的去垢剂如含Saponin (P0095)或Digitonin (ST1272)的通透液，但仍然可能会一定程度的影响脂滴的形态。
c.染色。
(a)取出待检测的细胞，PBS洗涤1-2遍。
(b)吸除PBS，加入适当体积的Staining Solution，通常96孔板每孔加入100μl，24孔板每孔加入250μl，12孔板每孔加入500μl，6孔板每孔加入1ml。37ºC下避光孵育1小时。如果LipiD-Green荧光信号比较弱，可以延长至2小时或更长时间。
(c)PBS洗涤两遍。
d.检测。使用荧光显微镜观察时，LipiD-Green选择使用469nm左右激发，观察绿色荧光。
注：使用荧光显微镜拍照时，为了减少荧光淬灭，尽可能降低荧光显微镜的激发光强度，缩短拍照时间。
3.流式细胞仪检测。
a.细胞准备。
(a)贴壁细胞胰酶消化后用培养液重悬，并用PBS洗涤一次；悬浮细胞250-1000×g室温离心5分钟，弃上清，用PBS洗涤一次。每个样品推荐的细胞用量为106个细胞。
(b)400×g室温离心5分钟，弃上清。
b.固定(选做)。
(a)加入4%多聚甲醛固定液(P0099)，轻轻吹打重悬为单细胞悬液，室温固定10-15分钟。
(b)固定结束后，400×g室温离心5分钟，弃上清。
(c)加入0.5ml PBS后缓慢用移液器吹打洗涤，然后400×g室温离心5分钟，弃上清。
注1：LipiD-Green和Hoechst 33342都适用于活细胞染色，也适用于固定后细胞的染色。
注2：由于醇类能够溶解脂质，因此请使用醛类固定液进行固定。
注3：如果需要进行免疫染色而进行细胞通透，须避免使用含Triton X-100或Tween-20等去垢剂的通透液，而使用不会溶解细胞膜的去垢剂如含Saponin (P0095)或Digitonin (ST1272)的通透液，或BeyoFC™流式检测细胞通透与洗涤液(Saponin) (C1717)，但仍然可能会一定程度的影响脂滴的形态。
c.染色。
(a)对于上一步骤的细胞沉淀，除背景对照管外，其余每管加入0.5ml Staining Solution，轻柔并充分重悬细胞，37ºC避光孵育1小时。如果LipiD-Green荧光信号比较弱，可以延长至2小时或更长时间。
(b)400×g室温离心5分钟，弃上清。
(c)每孔加入0.5ml PBS后缓慢用移液器吹打洗涤，然后400×g室温离心5分钟，弃上清。
(d)每孔加入0.5ml PBS重悬细胞。
d.检测。检测时参考LipiD-Green光谱特征选择合适的检测条件，例如Ex/Em=469/495nm。
注1：使用仅含Assay Buffer并且未经染色的细胞样品用于流式细胞仪的阴性对照设置。
注2：由于流式检测比较灵敏，使用的荧光探针浓度可能要比荧光显微镜检测时要低，此时可根据细胞类型和实际染色情况对LipiD-Green的稀释倍数进行适当调整。
4.荧光酶标仪检测。
a.接种培养。将细胞接种于96孔板黑色多孔板中，如BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)，每孔的细胞数需要控制在100-10,000个，通常宜在2000-5000个范围内。按实验设计对细胞进行一定处理。
b.固定(选做)。
(a)取出待检测的细胞，使用PBS洗涤两遍，吸除PBS。
(b)加入4%多聚甲醛固定液(P0099)室温固定10-15分钟。
注1：LipiD-Green和Hoechst 33342都适用于活细胞染色，也适用于固定后细胞的染色。
注2：由于醇类能够溶解脂质，因此请使用醛类固定液进行固定。
注3：如果需要进行免疫染色而进行细胞通透，须避免使用含Triton X-100或Tween-20等去垢剂的通透液，而使用不会溶解细胞膜的去垢剂如含Saponin (P0095)或Digitonin (ST1272)的通透液，但仍然可能会一定程度的影响脂滴的形态。
c.染色。
(a)取出待检测的细胞，使用PBS洗涤1-2遍。
(b)吸除PBS，加入适当体积的Staining Solution，通常96孔板每孔加入100μl。37ºC下避光孵育1小时。如果LipiD-Green荧光信号比较弱，可以延长至2小时或更长时间。
(c)PBS洗涤两遍。
d.检测。参考LipiD-Green光谱特征，选取合适的波长进行读板，例如Ex/Em=469/495nm。具体根据酶标仪的特点选择，也不一定需要选用最大激发光/发射光波长来检测。
5.阳性对照的诱导方法。油酸(≥99%, Cell Culture Grade) (ST2053)可以诱导培养细胞内脂滴生成，从而可以作为阳性对照。诱导培养细胞内形成脂滴的具体方法如下。
a.37ºC条件下加热油酸，使其完全成为液体。
b.取63μl的油酸，加入到937μl的DMSO中，充分混匀，配制成200mM的油酸贮存液。贮存液可以保存在4ºC，使用时37ºC条件下加热混匀后即可使用。
c.细胞诱导前，配制含油酸的完全培养液。使用细胞的完全培养液按500:1稀释油酸贮存液，使油酸终浓度为400μM。
注：油酸具有一定的细胞毒性，因细胞而异，可以根据不同细胞状况调整油酸的使用终浓度。
d.待检测的细胞加入含油酸的完全培养液，37ºC培养过夜。一般情况下，次日可以观察到囊泡状的脂滴。
参考文献：
1.Olzmann JA, Carvalho P. Nat Rev Mol Cell Biol. 2019. 20(3):137-155.
2.Thiam AR, Farese RV Jr, Walther TC. Nat Rev Mol Cell Biol. 2013. 14(12):775-86.
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