碧云天研发生产的BeyoCUBIC™ 3D细胞透明化试剂盒(BeyoCUBIC™ 3D Cell Culture Clearing Kit)是一种非常高效、便捷的对3D培养的细胞进行高质量、高透明度透明化处理的试剂盒。经本试剂盒透明化处理的3D细胞球，可以与后续的免疫荧光、免疫组化、常规或荧光染色、生物发光等结合起来，实现3D细胞球的三维成像，从而广泛用于生物、医学领域的研究。

CUBIC (Clear, unobstructed brain/body imaging cocktails and computational analysis)是一种简单、有效的动物组织透明化处理方法[1]。碧云天的BeyoCUBIC™ 3D Cell Culture Clearing Kit和常规的CUBIC透明化效果基本一致。

本试剂盒适用范围广。本试剂盒可用于各种方法培养出的3D细胞球，包括细胞悬滴培养板、超低吸附细胞培养板、Matrix-Gel™基质胶或Matrigel包被的平板等。

本试剂盒实验操作简单便捷。使用本试剂盒提供的BeyoCUBIC™ 3D Solution简单浸泡3D细胞球10分钟，就可以轻松实现3D细胞球的透明化，无需使用任何特殊的仪器或设备。

本试剂盒透明化时间短。3D细胞球先经4%多聚甲醛固定液(P0099)固定10分钟，固定结束后使用BeyoCUBIC™ 3D Solution作用10分钟即可完成3D细胞球的透明化。

本试剂盒处理的3D细胞球透明度高。本试剂盒所使用的透明化试剂BeyoCUBIC™ 3D Solution具有很强的脱色和脱脂能力，能有效实现3D细胞球的透明化。本试剂盒和Thermo的CytoVista™ 3D Culture Clearing Reagent (V11326)、Abcam的3D cell Culture Clearing Reagent (ab243302)的使用效果基本一致。

本试剂盒兼容荧光蛋白和后续的荧光染色。本试剂盒在使用过程中可以充分保护荧光蛋白的稳定性，不会导致EGFP、EYFP、mCherry等荧光蛋白的变性而失去荧光。3D培养的HCT-116和HeLa细胞经本试剂盒透明化后使用Beyo3D™ DAPI染色液(C1341)的染色效果对比参考图1。

图1.碧云天BeyoCUBIC™ 3D细胞透明化试剂盒(P0121)对3D培养的HCT-116和HeLa细胞透明化后DAPI染色的效果对比图。5000个HCT-116细胞和1500个HeLa细胞在碧云天的BeyoGold™超低吸附96孔板(圆底带盖, 独立包装) (FULA962)培养48小时，细胞球经固定和透明化处理后(After)，使用Beyo3D™ DAPI染色液(C1341)进行染色，以未经固定和透明化处理的细胞球作为对照(Before)。染色结果显示，3D细胞球经透明化处理后的染色效果明显更佳。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

传统的细胞培养大多以二维(Two-dimensional, 2D)的形式展开，但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异，可能会因为细胞结构和组织形态的缺失，使实验结果的可信度降低[2-4]。三维(Three-dimensional, 3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境，更能代表体内组织，也能更真实的反应细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用，细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应，3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型，能够获得与体内实验更加一致的实验结果[5-6]。

3D肿瘤细胞模型越来越多地被用于了解疾病机制和药物研发。2D培养的肿瘤细胞，其单侧细胞膜可以均匀地获得营养和氧气，而3D培养的肿瘤细胞团的内部细胞获得营养和氧气的机会更少，形成自然的营养和氧气梯度，能更好地模拟体内微环境条件，因此3D培养的肿瘤球状体(Spheroid)或肿瘤类器官(Organoid)等能更好地模拟体内肿瘤，更利于小分子药物筛选或者肿瘤相关分子机制的研究，也更能准确地预测药物治疗的体内反应、疗效或毒性。同时，2D肿瘤细胞模型体外扩增有一定局限性，在传代后容易丧失原肿瘤的遗传异质性，出现优势克隆选择性，从而降低临床相关性。相比于2D细胞模型，3D细胞球或者类器官很多情况下下能提供更可信的研究结果，简化并加速药物评价流程。自2009年小肠类器官首次建立至今，3D细胞和类器官研究已经扩展到很多组织系统，并成为生命科学最热门的领域之一。

按照96孔板每孔100μl细胞需要100μl 50% BeyoCUBIC™ 3D Solution，每5ml的BeyoCUBIC™ 3D Solution可以进行100个样品检测。

-20ºC保存，一年有效。BeyoCUBIC™ 3D Solution须-20ºC避光保存，100X Wash Buffer可以4ºC保存。

BeyoCUBIC™ 3D Solution使用前，需室温静置至完全融化，确保液体透明并且没有沉淀。如果有晶体析出或溶液不透明，可以短时间置于55ºC水浴溶解至完全透明并且没有沉淀。

BeyoCUBIC™ 3D Solution在高温(>75ºC)下失效，注意不可高温处理。

BeyoCUBIC™ 3D Solution处理后细胞球会变软，导致细胞球在外力的作用下容易变形或分散，所以在整个实验过程中请缓慢、小心进行，以免吹散细胞球。

BeyoCUBIC™ 3D Solution很容易清除掉油性笔迹。使用时请尽量盖紧盖子，并用Parafilm密封盖子，防止漏液。建议同时在管盖和管体上进行样品标记，以免样品信息丢失。

BeyoCUBIC™ 3D Solution处理过程中如果出现浓烈的氨气气味，提示溶液可能已经失效，请及时更换新鲜的BeyoCUBIC™ 3D Solution，以免影响透明化效果。

为了保证BeyoCUBIC™ 3D Solution长期有效，需要-20ºC避光保存。但使用时，为了方便观察细胞透明化效果，可以在非严格避光条件下对样品进行透明化处理。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。