碧云天的BeyoSTR™细胞株STR鉴定试剂盒(Human, 16 Loci)，英文名为BeyoSTR™ Cell Line Identification Kit by STR (Human, 16 Loci)，也称Cell Line Authentication STR Profiling Kit、Cell STR Testing Kit，简称人细胞株STR鉴定试剂盒或细胞STR鉴定试剂盒，是一种通过多达16个STR位点进行多重荧光PCR和毛细管电泳，快速、准确、高灵敏地进行STR基因分型检测，以用于人源细胞株鉴定的试剂盒。本试剂盒也可用于人体样本的法医分析或亲缘关系鉴定等｡

本产品和Thermo公司旗下Applied Biosystems品牌的CLA IdentiFiler™ Plus PCR Amplification Kit (A44660)和Promega公司的PowerPlex® 16 HS System (DC2100/DC2101)的检测原理和方法基本一致。

细胞株鉴定(Cell Line Authentication)是指对广泛应用于科学研究和药物开发的模式细胞进行鉴定。在科学研究过程中，如果使用了交叉污染或错误辨识的细胞将导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗重大失误等严重问题出现。近年来NIH、ATCC、Nature和Science等多家组织机构多次呼吁，要求研究者对细胞株进行鉴定，从而避免相关问题发生[1]。

STR基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定。STR (Short Tandem Repeat，短串联重复序列)基因位点由长度约为2～7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹。STR基因座位上的等位基因可通过PCR扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，根据所得的STR分型结果与多个数据库的细胞株STR数据进行比对，从而推算出样品所属的细胞株或可能的交叉污染的细胞株名称[2]。

培养过程中细胞株之间的交叉污染或细胞株本身的错误辨识是一个持续存在的问题。据统计，细胞交叉污染的发生频率接近16-35% [3-4]。因此，在下列情况中，建议对所使用的细胞株进行鉴定：1)新的细胞株进入实验室；2)细胞株经历长时间培养后(传代超过10代)；3)准备新的细胞库或新构建的细胞株登记入册前；4)细胞株的表型发生明显变化或实验结果与预期相差较大时；5)使用细胞进行临床试验前；6)涉及细胞的项目或课题开始/结束时；7)使用冻存时间较久或相关信息标记不明确的细胞株进行实验前。

STR标记的多态性或信息性显示了不同来源的细胞中等位基因之间和位点之间重复单元数量的差异，如图1所示。从二倍体细胞株获得的染色体上的特定位点有两个等位基因的拷贝，分别来自不同的染色体(M/P，M为母本染色体，P为父本染色体)。如果STR基因的两个等位基因具有相同数量的重复单元，其扩增产物为具有相同大小的片段且在毛细电泳中表现为单个扩增峰；如果STR基因的两个等位基因具有不同数量的重复单元，则其对应扩增产物为两个不同大小的片段且在毛细电泳中表现为两个扩增峰[5]。通常情况下，人源或小鼠细胞的STR图谱中，一个基因座只会出现1个或2个扩增峰，若出现3个及以上扩增峰时，即称该位点存在多等位基因，此时可能为细胞样品存在三倍体等多倍体突变或细胞交叉污染的情况，具体还需要根据多等位基因出现的频率及最终与数据库的比对结果进一步确定。

图1.STR多态性分析示意图。

STR结果可以与ATCC、DSMZ及中国国家实验细胞资源共享平台等网站的数据库进行比对。目前，ATCC及DSMZ数据库通常采用9个位点(包括8个核心STR位点和Amelogenin性别决定位点)的STR数据计算待测细胞与匹配细胞的匹配度，当匹配度80%以上即可认为该细胞株正确。除此之外的STR位点则有助于提升细胞株鉴定的准确性及对来源接近的细胞株之间的分辨率，且位点越多，细胞鉴定的准确性及分辨率越高[6]。使用本试剂盒对PCR对照模板HT1080细胞(人成纤维肉瘤细胞)gDNA进行多重荧光PCR及毛细管电泳分析的结果请参考图2。其对应数据在DSMZ数据库的比对结果如图3所示。

图2.碧云天BeyoSTR™细胞株STR鉴定试剂盒(Human, 16 Loci) (D8505)用于HT1080细胞(人成纤维肉瘤细胞)STR基因分型的检测效果图。使用本试剂盒以200ng HT1080细胞gDNA为模板进行多重荧光PCR扩增，产物使用ABI测序仪(3730xl DNA Analyzer)与50cm毛细管分析。x轴代表产物及内标GeneScan™ 500 LIZ的碱基数，y轴代表相对荧光强度。蓝色峰显示FAM荧光素标记的基因座的峰：D3S1358、TH01、D21S11、D18S51和Penta E；绿色峰显示HEX标记的基因座的峰：D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO和Penta D；黑色峰显示TAMRA标记的基因座的峰：Amelogenin (AMEL/AME/AM)、vWA、D8S1179、TPOX和FGA；橙色峰显示GeneScan™ 500 LIZ®的100bp至430bp片段。图中各位点的等位基因读取，参见使用说明的“4.结果读取和分析”。实际检测结果会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中检测结果仅供参考。

图3.使用本试剂盒对HT1080细胞(人成纤维肉瘤细胞)进行细胞株鉴定的结果图。将上述分析所得的HT1080细胞STR图谱数据输入DSMZ数据库进行比对，结果显示该细胞与HT1080细胞匹配度为96%，可认为该细胞株正确，其D13S317位点出现的多等位基因可能为细胞变异。CCL-121为HT1080细胞在ATCC的编号。实际检测结果会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中检测结果仅供参考。

本试剂盒基于多重荧光PCR-毛细管电泳法，可用于对人源细胞的16个基因座(15个STR位点和1个性别位点)进行多重扩增和三色荧光检测。检测的基因座包括D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、Penta E、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、Amelogenin、vWA、D8S1179、TPOX和FGA，共16个位点，其中Amelogenin为性别确定位点。具体信息如下表：

本试剂盒提供了扩增上述16个基因座所需的全部试剂，用户可在扩增完成后通过毛细管电泳分析待测样品生成等位基因图谱，从而进行最终的结果分析。本试剂盒同时提供PCR对照模板(HT1080细胞基因组)，可辅助判断试剂盒是否正常工作，同时可作为结果分析的参考。如需获取本试剂盒对应的数据分析panel，可联系碧云天技术服务service@beyotime.com。

按使用说明操作，扩增体系的体积为10µl时，本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行50次和200次反应。

-20ºC保存，一年有效。其中BeyoSTR™ Human 16 Loci Primer Mix (4X)须避光保存。

本试剂盒仅提供多重荧光PCR实验所需试剂，如需对产物进行毛细管电泳及分析，可联系碧云天技术服务service@beyotime.com。碧云天同时提供专用于STR基因分型多重扩增的高效PCR预混液BeyoSTR™ Multiplex PCR Master Mix (4X) (D8507)。

建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系，这样可以最大限度的避免污染。推荐使用碧云天BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。

BeyoSTR™ Human 16 Loci Primer Mix (4X)中含有荧光染料，保存本产品或设置荧光PCR反应时应避免强光照射，以尽量避免发生荧光淬灭。

经测试，本试剂盒反复冻融10次对使用效果无显著影响，但仍需尽量避免反复冻融。反复冻融可能使产品性能下降。

样品进行多重荧光PCR后，需要使用毛细管电泳仪进行分离基因分析｡当使用不同的聚合酶或仪器组合时，等位基因的大小可能会有所不同。

由于本试剂盒灵敏度特别高，通常建议把样品制备的房间、PCR反应体系配制的房间、处理扩增产物的房间按顺序分成3个房间，以避免出现产物污染的情况。通常对于PCR产物进行开盖和毛细管电泳分析的地方，宜远离样品制备和PCR反应体系设置的地方。

对于毛细管电泳、分析或直接进行细胞株STR鉴定，可联系碧云天技术服务service@beyotime.com，或点击https://www.beyotime.com/support/STR.htm。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。