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细胞相关> 细胞标记与染色> 流式检测
产品编号: C1737-1ml
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C1737-1ml BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X) 1ml 136.00元
C1737-5ml BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X) 5ml 551.00元

碧云天的BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X),英文名称为BeyoFC™ 7-AAD Staining Solution (50X),是一种基于远红荧光探针7-AAD (7-aminoactinomycin D)特异性染色细胞膜丧失完整性的坏死细胞的特性,从而能够特异地对坏死细胞进行荧光染色、用于流式细胞术检测时染色和排除死细胞的远红荧光染色液。

7-AAD,英文全称为7-aminoactinomycin D,中文名称叫做7-氨基放线菌素D,是一种能够嵌入核酸的荧光指示剂,形成的DNA复合物在546nm激发光下能够产生647nm的最大发射光,这一特性使其常用于多色荧光显微镜检测或流式细胞检测[1-2]。

7-AAD和碘化丙啶(PI)类似,是一种非细胞膜渗透性的荧光染料,不能穿过具有生物活性的细胞膜,因此被用来区分正常细胞与坏死细胞,也可以用于细胞固定或通透后的核酸染色。与碘化丙啶(PI)不同的是,被546nm的氩离子激光激发后,7-AAD的发射光谱较PI窄,且发射波长更长,对其它检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI的非常理想的替代品,可与多种488激发光激发的荧光染料联合使用,如FITC (异硫氰酸荧光素)、PE (藻红蛋白)、APC (别藻蓝蛋白)、Calcein AM等,在光谱的600nm左右有较弱的荧光,可用常规的荧光显微镜检测红色荧光,而在远红光650nm左右有较强的荧光,可用流式细胞仪FL3通道或配备650nm长通滤光片的荧光显微镜检测远红荧光。

7-AAD的分子式为C62H87N13O16,分子质量为1270.45,CAS number为7240-37-1。7-AAD与DNA结合后的最大激发光波长为546nm,最大发射光波长为647nm。7-AAD与DNA结合后的激发光与发射光光谱参考图1。

图1.7-AAD与DNA形成复合物后的激发光谱与发射光谱。

在流式细胞仪检测时,死细胞的存在可能会导致检测结果准确性降低。因为死细胞可能会与抗体发生非特异性结合,从而产生假阳性结果,并降低真实阳性信号的动态范围。同时,通常死细胞具有更高的自发荧光,且荧光信号分布广泛,这会导致较高的背景荧光,使对弱阳性样品及阳性比例较低样品的区分变得困难。常规操作中的离心、洗涤等步骤都会产生的少量死细胞,细胞活性较低的样品如非免疫组织细胞悬液、较长时间放置的血液样品等也会增加死细胞比例,因此流式实验中非常有必要通过7-AAD染色、PI染色等类似方法实现对于死细胞的荧光染色,以便于后续流式分析时排除死细胞。

本染色液已通过流式分析检测,可以简单便捷地进行细胞坏死检测,同时又不影响正常细胞的状态。使用本产品进行细胞坏死的流式细胞仪检测的效果请参考图2。

图2.碧云天BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X) (C1737)用于坏死细胞流式检测的效果图。100万个小鼠脾脏细胞(分离后冰上保存约48小时),用100µl BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711)重悬,加入2µl本产品并染色10分钟后进行流式检测。图中可见7-AAD染色组出现了远红荧光阳性的细胞群(7-AAD组)。Control组为不加7-AAD的阴性对照。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

按照每100µl细胞重悬液使用2µl BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X)进行检测,每1ml本产品可进行500次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C1737-1ml BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X) 1ml
C1737-5ml BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X) 5ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC避光保存,至少一年有效。

注意事项:

如果有细菌或真菌污染,可能会严重影响检测效果。

染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致坏死细胞的数量增加。

细胞经固定、通透和RNase处理后也可以使用7-AAD检测细胞周期,但更常用的是碘化丙啶(PI)。推荐使用碧云天的细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C1052)、一步法细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C1055)或BeyoFC™ PI/RNase即用型染色液(C7131)。

荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.细胞按照实验设计进行一定处理后,制备成单细胞悬液,计数。取适当细胞,4ºC,500×g离心5分钟,弃上清。每个样品推荐的细胞用量为1×106个。
2.加入100µl BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711),轻轻重悬细胞。
3.根据对应的抗体说明书进行细胞表面免疫荧光染色。
注:用于活死细胞区分染色时,本染色液与细胞固定及细胞内染色步骤不兼容。如果实验涉及到细胞固定及细胞内染色,则需使用可兼容固定步骤的胺反应性染料,并在表面染色开始前进行死细胞染色。
4.向细胞悬液中加入2µl BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X),吹打混匀后室温避光孵育5-10分钟
注:对于特定的细胞或特定的实验需求,也可以酌情4ºC避光孵育15分钟或更长时间。不同细胞的染色效果会有所不同,如需获得最佳的染色效果可以适当尝试不同的孵育时间。每批次实际检测时,不同样品须保持相同的孵育条件和孵育时间。
5.孵育结束后可直接使用流式细胞仪检测,7-AAD插入DNA后的最大激发光波长为546nm,最大发射光波长为647nm。
注1:在检测前,也可将细胞用BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液(C1711)洗涤1-3次,最后每个样品加入0.5-1ml BeyoFC™流式检测细胞染色缓冲液重悬细胞后用于检测,这样效果更好。
注2:上述使用说明仅供参考,可根据细胞类型、实际检测效果及流式细胞仪配置等进行一些优化或调整。如有必要,BeyoFC™ 7-AAD染色液(50X)可在0.5X-2X范围内摸索最佳工作浓度。
参考文献:
1.Wadkins RM, Jovin TM. Biochemistry. 1991;30(39):9469-9478.
2.Zembruski NC, Stache V, Haefeli WE, Weiss J. Anal Biochem. 2012;429(1):79-81.
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